Tóm tắt

Mục tiêu: xác định điều kiện và thử nghiệm áp dụng kỹ thuật seminested PCR phát hiện nấm Candida albicans. Phương pháp: thiết lập kỹ thuật seminested PCR trên cơ sở gen đích mã hóa rARN của chủng nấm Candida albicans ATCC®90028 và đánh giá thử trên 27 chủng nấm Candida albicans phân lập ở Việt Nam. Kết quả: xác định được điều kiện phản ứng PCR1, PCR2 cũng như ngưỡng phát hiện, tính đặc hiệu của kỹ thuật. PCR 1: nồng độ Mg2+ 1,5 mM, dNTPs 150 µM, nồng độ mồi 0,2 - 0,3 pmol/µl và nhiệt độ gắn mồi là 55oC. PCR2: nồng độ Mg2+ 2,0 mM, dNTPs 200 µM, nồng độ mồi 0,2 pmol/µl và nhiệt độ gắn mồi 55,2oC. Kỹ thuật seminested PCR có khả năng phát hiện chính xác nấm C. abicans ở ngưỡng ≥ 10 pg/µl. Sau khi được thiết lập, đánh giá kỹ thuật trên ADN của 27 chủng C. albicans phân lập ở Việt Nam, kết quả cho thấy, cả 27 chủng đều cho band đặc hiệu có kích thước 410 bp như mong đợi. Kết luận: kỹ thuật seminested PCR thu được cho phép xác định chính xác nấm Candida albicans. * Từ khóa: Candida albicans; Seminested PCR.

Abstract

Aims: To establish and evaluate a system of seminested polymerase chain reaction (PCR) assays to identify Candida albicans. Methods: DNA of Candida albicans ATCC®90028 and 27 samples from Vietnam was extracted and used as a template in PCR assays targeting the ribosomal DNA of Candida albicans. Results: PCR1 and PCR2 assays were optimized to detect exactly rRNA gene of Candida albicans. PCR1 with 1.5 mM Mg2+, 150 µM of each deoxyribonucleotide, 0.2 - 0.3 pmol/µl of each primer and annealing temperature 55oC. PCR2 with 1.5 mM Mg2+, 200 µM of each deoxyribonucleotide, 0.2 pmol/µl of each primer and annealing temperature 55.2oC. The limited concentration for detection of C. albicans was not less than 10 pg per µl DNA of C. albicans in total volume of PCR1 assay. We obtained positive reactions for all 27/27 samples from patients who had been previously diagnosed with Candidiasis of C. albicans by conventional techniques. Conclusions: The seminested PCR assays described here can support the diagnosis of Candida albicans. * Key words: Candida albicans; Seminested PCR.